مهندسی متابولیک مسیر موالونات برای تولید لینالول در مخمر ساکارومایسس سرویزیه

thesis
abstract

مونوترپنوئیدها ساده ترین دسته ترپنوئیدها می باشند و تنها از 10 اتم کربن (دو واحد ایزوپرن) تشکیل شده اند و عمده ترین اجزا روغن های ضروری گیاهی را تشکیل می دهند. بیش تر اعضای این خانواده از ترکیبات طبیعی، توسط مونوترپن سینتازها یا سیکلازها که تبدیل جرانیل دی فسفات را به والد حلقوی اسکلت مونوترپن های متعدد کاتالیز می کند، ساخته می شوند. جرانیل دی فسفات یک ترکیب غیر حلقوی حدواسط 10 کربنه در بیوسنتز ایزوپرنوئیدها می باشد. در گذشته بیشتر مطالعات به روی تولید یک مسیر هترولوگوس خاص برای تولید مونوترپنوئیدها در escherichia coli متمرکز شده بود اما امروزه میکرواورگانیسم های یوکاریوتی مانند مخمر ساکارومایسس سرویزیه به دلیل مشخصات خاصشان به عنوان یک میزبان میکروبی مناسب برای بیان ژن های فعال یوکاریوتی مورد توجه قرار گرفته اند. ساکارومایسس سرویزیه قادر به تولید و ترشح کارآمد مونوترپن ها نمی باشد که علت عمده آن عدم حضور آنزیم های مونوترپن سینتاز در این میکرواورگانیسم است. در این مطالعه به وسیله ابزار مهندسی متابولیک مسیر بیوسنتز ایزوپرنوئیدها در مخمر ساکارومایسس سرویزیه، با بیان ژن تولیدکننده آنزیم لینالول سینتاز تغییر داده شد. این آنزیم از جرانیل پیروفسفاتی که طی مسیر موالونات در مخمر تولید می شود، به عنوان سوبسترا استفاده کرده و آن را به لینالول تبدیل می کند. لینالول یک مونوترپن غیرحلقوی است که در رایحه گل های بسیاری از گیاهان یافت می شود و علاوه بر مصرف گسترده در صنعت، در درمان سرطان سینه و لوسمی نیز کاربرد دارد. ژن لینالول سینتاز از گیاه اسطوخودوس به وکتورهای بیانی متفاوتی از ساکارومایسس سرویزیه وارد شد. این وکتورهای بیانی تحت کنترل 4 پروموتور ساختاری با قدرت های متفاوت ناشی از ژنهای کدکننده سیتوکروم c اکسیداز (cyc1)، الکل دهیدروژناز(adh)، گلیسر آلدهید 3 فسفات دهیدروژناز(gpd) و فاکتور طویل سازی ترجمه 1 آلفا(tef) ، می باشند. سپس این وکتورهای بیانی به درون مخمر ساکارومایسس سرویزیه انتقال داده شدند و حضور ژن لینالول سینتاز با آنالیز pcr به روی dna ژنومی مخمر تائید شد. میزان بیان ژن فعال لینالول سینتاز در مخمرهای دستورزی شده توسط اندازه گیری انتشار لینالول با استفاده از میکرو استخراج فاز جامد اندازه گیری شد. نتایج به دست آمده میزان بیان لینالول در مخمرها را تا میزان 4 میکروگرم در لیتر تائید کرد. همچنین سیستم های بیانی متشکل از پروموتورهای ذکر شده که با ترمیناتور(خاتمه دهنده) cyc1 همراه بودند با یکدیگر مقایسه شدند و مشخص شد که میزان بیان ژن لینالول سینتاز در وکتورهای بیانی با پروموتور gpd نسبت به بقیه بیشتر است. میزان بیان ژن مذکور تحت تاثیر پروموتور tef بیشتر از adh بود ولی نشانه ای از بیان ژن در وکتورهای تحت کنترل پروموتور cyc1 ارزیابی نگردید.

similar resources

کاربرد مهندسی ژنتیک در تغییر سوخت وساز مخمر ساکارومایسس سرویزیه

مخمر ساکارومایسس سرویزیه مهم ترین مخمر صنعتی برای تولید محصولات بیوشیمیایی، پروتئین های نوترکیب و پروتئین تک یاخته است. برای افزایش قابلیت های این مخمر در استفاده وسیع تر از منابع فراوان کربن، مانند زایلوز و لاکتوز، افزایش بازدهی تولید محصولات و تسهیل فرایند تخمیر صنعتی می توان از روش های متنوع مهندسی ژنتیک، با هدف تغییر در مسیر یا مسیرهای طبیعی سوخت وساز مخمر استفاده کرد. این تغییرات در شاخه ا...

full text

هیدرولیز اسیدی ضایعات نان برای تولید بیواتانول توسط مخمر ساکارومایسس سرویزیه (Saccharomyces cerevisiae)

در حالی­که به میزان زیادی ضایعات نان هر ساله تولید می­شود، به دلیل آلودگی به افلاتوکسین، این ضایعات مناسب مصارف غذایی و خوراک دام نیستند. در این پژوهش تولید بیواتانول از ضایعات نان توسط مخمر ساکارومایسس سرویزیه[1] به روش هیدرولیز اسیدی مورد تحقیق قرار گرفت. هیدرولیز اسیدی در دستگاه اتوکلاو انجام شد. اثر غلظت محلول اسیدی و زمان بر میزان گلوکز بررسی گردید. آزمایش­ها در بارگذاری 160 گرم بر لیتر ان...

full text

بررسی رشد و تولید ۲co در سویه های صنعتی ساکارومایسس سرویزیه مناسب برای تولید مخمر نانوایی

چکیده در این تحقیق میزان تولید 2co توسط نمونه­های مختلف پودرهای تجاری مخمر نانوایی بعنوان شاخصی از قدرت تخمیر آن­ها مورد بررسی قرار گرفت و اختلاف در کیفیت و قدرت فرآوری محصولات مشاهده گردید در ادامه سویه­های صنعتی ساکارومایسس سرویزیه از نمونه­های تجاری جداسازی شد و با استفاده از محیط­های مایع مشابه خمیر و سامانه­ی اندازه­گیری تولید گاز در محیط مایع، قدرت تخمیر کنندگی این سویه­ها مقایسه گردید. م...

full text

اثر مخمر پروبیوتیکی ساکارومایسس سرویزیه بر تشکیل بیوفیلم استافیلوکوکوس اورئوس

Background and Objective: Biofilm formation is an important virulence factor in Staphylococcus aureus. Most infections associated with biofilm of this bacterium are difficult to treat with antibiotics. As yet, a lot of mechanisms have been explained for probiotic yeast functions against bacterial infections, but few studies have been done on their effects on biofilm formation. The aim of this s...

full text

بیش بیان ژن کدکننده آنزیم hmg-coa ردوکتاز به منظور افزایش تولید هترولوگ لینالول در مخمر ساکارومایسس سرویزیه

ترپنوئید ها دسته ای متنوعی از متابولیت های ثانویه هستند که بیش تر در بافت های گیاهی به عنوان جزء اصلی روغن های ضروری یافت می شوند. به دلیل کاربرد گسترده این ترکیبات در صنایع دارویی، آرایشی و غذایی تولید میکروبی این ترکیبات اخیرا بسیار مورد توجه قرار گرفته است. مخمر ساکارومایسس سرویزیه به دلیل وجود مسیر موالونات به طور طبیعی حاوی پیش ماده ضروری سنتز ترپنوئید ها (ipp ) است و از این رو پتانسیل تول...

15 صفحه اول

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه صنعتی اصفهان - دانشکده کشاورزی

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023